Aplicação da técnica de fluorescência para avaliação de microrganismos visando a construção de biossensores

Resumen en Portugués:

A identificação rápida e precisa de microrganismos constitui-se em etapa primordial e de extrema importância no diagnóstico de patologias, controle de qualidade na indústria de alimentos e agricultura. Desta forma, é necessário o desenvolvimento de um método que seja rápido, eficaz e de baixo custo. O uso da técnica de fluorescência tem como vantagens: (a) ser de baixo custo quando comparado com outras técnicas não fotônicas; (b) permitir a obtenção dos resultados em poucos segundos; (c) realizar as medidas in situ; (d) nenhuma ou pequena preparação de amostra é necessária e (e) não há geração de resíduos químicos. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi aplicar a fluorescência para avaliação de microrganismos e, em especial, a ação do peptídeo antimicrobiano (PAM) polycerradin, com intuito de utilizá-lo como bioreceptor na confecção de biossensor. Os espectros de fluorescência para avaliação dos microrganismos puros e sob ação do PAM foram obtidos utilizando um espectrofluorímetro Shimadzu, RF-5301PC, com comprimento de onda de excitação fixo em 280 nm e um intervalo de detecção de 290-550 nm. Após crescimento em ágar, as suspensões microbianas foram preparadas em solução salina conforme orientações do CLSI. O PAM polycerradin foi solubilizado em água destilada esterilizada em uma concentração de 10 mg/mL. Para análise instrumental, foram depositados em uma cubeta 3 ml da suspensão microbiana e 0,5 ml do PAM (espectros foram obtidos em triplicata). A partir da análise dos espectros de emissão foi realizado um estudo comparativo entre a amostra microbiana antes e após a adição do PAM, tendo sido verificado que a intensidade de emissão para diversos microrganismos diminuiu em até 100 vezes após a adição do composto antimicrobiano